原代細胞的體外培養過程中，其生長時往往會混有多種不同類型的細胞。比如來自皮膚組織的細胞進行培養時可以出現表皮細胞與纖維下撥同時生長的情況。所以原代細胞的分離純化在初期細胞培養時比較關鍵。
 

原代細胞的純化方法主要有以下幾種：

一、自然純化法：

原代細胞由于具有較強的增殖能力，因此可以采用通過長期多代傳代生物方式單獨培養某一類型的目的細胞，靠自然優化的方式進行細胞純化，這種方法的缺陷是無法按實驗需求去自由去自由選擇要培養的細胞。而且培養周期較長，適合應用于腫瘤細胞、成纖維細胞等細胞系建立使用。
 

二、人工純化法：

人工純化的方法在細胞純化方面應用較為廣泛，它是通過人工干預的方式，營造利于目的細胞生長的環境條件，從而抑制目的外細胞的生長從而達到細胞純化的一種純化方式。目前通用的主要有以下幾種：

酶消化純化法：

根據上皮細胞與成纖維細胞對胰蛋白酶的耐受能力是不相同的，所以采用酶消化的方式可以使這兩種細胞有效分開。這種純化方法不僅適用于貼壁細胞，同樣適用于半貼壁細胞和黏附細胞等。
 

操作步驟如下：

1.將0.25%胰蛋白酶分兩次加入25ML的細胞培養瓶中，并輕搖勻。每次加入的量約為1ML左右，當胰蛋白酶覆蓋細胞表面時，緩緩倒出。

2.擰上瓶蓋進行細胞消化，在顯微鏡下觀察到纖維細胞部分脫落時，即可加入培養基停止消化。

3.在培養瓶上標注不同類型的生長區域。加入培養基繼續進行多次傳代培養后即可分離。

機械刮分法：

在進行貼壁培養時，不同類型的細胞往往會成片區狀混雜生長，我們可以使用細胞刮去除非目的細胞區域，具體操作步驟如下 ：

1.將培養瓶置于顯微鏡下，找出不同細胞類型的生長區域并用硅膠細胞刮劃分非目的細胞使其懸浮于培養基中，操作是需要注意不要傷及目的細胞。

2.加入適量培養基進行沖洗，反而后繼續加入培養基進行培養，如此反復多次即可達到純化分離效果。
 

反復貼壁培養法：

由于成纖維細胞的貼附速度優于上皮細胞，一般情況下，10-30分鐘即可完成貼壁過程，而上皮細胞則需較長時間才能完成貼壁生長。利用這一原理分離純化細胞步驟如下：

1.在培養瓶內加入適量的培養基，混入細胞懸液常溫下靜置20分鐘。

2.當顯微鏡下觀察細胞開始出現貼壁時，緩緩搖動后，將細胞懸浮液，輕導另一個培養瓶中，重復第一步操作。

3.重復多次后即可實現細胞的純化和分離。

原代細胞的分離和純化對于后續的傳代培養起著重要的作用，也會直接影響到細胞系的穩定性，所以也可以多種方法綜合使用以增加細胞純化力度，盡可能保證原代細胞的可靠一致性。
 

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